關于鹽酸二甲雙胍中(zhōng)遺傳毒性物(wù)質NDMA檢測方案（氣質、液質）

1. 概述

遺傳毒性是指遺傳物(wù)質中(zhōng)任何有害變化引起的毒性，而不參考誘發該變化的機制，又(yòu)稱爲基因毒性。遺傳毒性雜(zá)質是指能引起遺傳毒性的雜(zá)質，包括緻突變型雜(zá)質和其他類型的無緻突變性雜(zá)質。緻突變型雜(zá)質指在較低水平時也有可能直接引起DNA損傷，導緻NDA突變，從而可能引發癌症的遺傳毒性雜(zá)質。目前遺傳毒性列表中(zhōng)有1574種緻癌物(wù)質，亞硝胺類、磺酸酯類和苯并芘類等屬于高遺傳毒性物(wù)質。由于遺傳毒性雜(zá)質在低暴露水平時就可能導緻嚴重的毒性，存在重大(dà)的安全風險，所以評估和控制藥品中(zhōng)的遺傳毒性雜(zá)質是保障藥品質量和安全的重點。

2. NDMA的基本信息

N- 二甲基亞硝胺又(yòu)稱二甲基亞硝基胺，縮寫爲 NDMA，黃色液體(tǐ)，可溶于水、乙醇、乙醚、二氯甲烷，屬于亞硝胺類化合物(wù)。NDMA的合成通常由二甲胺與亞硝酸鹽在酸性條件下(xià)反應生(shēng)成。NDMA在環境、工(gōng)業産品、煙草及腌制食品等中(zhōng)廣泛存在，常用作溶劑、有機合成中(zhōng)間體(tǐ)等。分(fēn)子式爲C2H6N2O，分(fēn)子量74.08。根據歐盟發布的《Development of structure alerts for the in vivo micronucleus assay in rodents》中(zhōng)的相關信息，可知(zhī) NDMA 的結構式中(zhōng)含有烷基亞硝酸鹽的遺傳毒性警示結構。此外(wài)，有文獻報道，在已檢測的 300 種亞硝胺類化合物(wù)中(zhōng)，已證實有 90% 至少可誘導一(yī)種動物(wù)緻癌，其中(zhōng)乙基亞硝胺、二乙基亞硝胺和二甲基亞硝胺至少對 20 種動物(wù)具有緻癌活性。根據 ICH M7 通則對基因毒性雜(zá)質的分(fēn)類原則，NDMA 應屬于第一(yī)類已知(zhī)誘變性和緻癌性的物(wù)質。在世界衛生(shēng)組織國際癌症研究機構公布的緻癌物(wù)清單中(zhōng) NDMA 被列爲 2A 類緻癌物(wù)。

3. NDMA雜(zá)質的來源及控制限度

是遺傳毒性雜(zá)質主要來源于原料藥合成過程中(zhōng)的起始物(wù)料、中(zhōng)間體(tǐ)、試劑和反應副産物(wù)。此外(wài)，藥物(wù)在合成、儲存或者制劑生(shēng)産過程中(zhōng)也可能會降解産生(shēng)遺傳毒性雜(zá)質。藥物(wù)中(zhōng) NDMA 的可能來源包含以下(xià)方面：

1. 硝酸環境下(xià)與體(tǐ)系中(zhōng)的二甲胺發生(shēng)反應得到

2. 藥物(wù)本身發生(shēng)降解産生(shēng)二甲胺，然後繼續與硝酸鹽反應得到

3. 生(shēng)産工(gōng)藝過程中(zhōng)使用了二甲胺前體(tǐ)試劑，由其發生(shēng)降解得到

4. 藥物(wù)含有二甲胺或者類似結構，通過氯胺化或者氧化等途徑降解産生(shēng) NDMA，如雷尼替丁、二甲雙胍等

5.  藥物(wù)合成過程中(zhōng)使用了疊氮試劑或亞硝酸鹽，在有二甲胺供體(tǐ)的情況下(xià)反應生(shēng)成 NDMA，如四氮唑類

藥物(wù)缬沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦等

6. 其他途徑引入，如制藥用水、輔料等

參考 ICH M7 通則對遺傳毒性雜(zá)質的分(fēn)類原則，NDMA 應屬于第一(yī)類已知(zhī)具有基因毒性和緻癌性的物(wù)質，其控制不高于化合物(wù)可接受限度（AI）。根據 WHO 的數據，NDMA 的 AI 值爲 0.005~0.016 μg/kg，換算後爲 0.375~1.2 μg/ 天。但對于缬沙坦等患者需要長期服用的藥物(wù)來說，對其中(zhōng)的遺傳毒性雜(zá)質的控制要求則更爲嚴格。“缬沙坦事件”後，中(zhōng)國藥品監督管理局在官網上公示了國家藥典委《關于缬沙坦國家标準修訂稿》，增訂了缬沙坦生(shēng)産要求，規定了 NDMA 的限度不得過千萬分(fēn)之三（相當于 EMA 的暫定參考限定值 0.3ppm）。“缬沙坦事件”持續發酵後，2018 年 12 月，FDA 發布了血管緊張素 II 受體(tǐ)拮抗劑（ARB）中(zhōng)亞硝胺雜(zá)質的臨時可接受攝入水平供生(shēng)産商(shāng)用以确保其制劑産品對患者是安全的。從 FDA 發布的 ARB 藥物(wù)中(zhōng)NDMA 和 NDEA 臨時限度列表可知(zhī)，NDMA 的可接受攝入量爲 96 ng/ 天。根據各 ARB 的最大(dà)日劑量，則可計算 NDMA 的可接受攝入含量。如缬沙坦以最大(dà)日劑量 320 mg 計，NDMA 的可接受含量爲 0.3 ppm，與中(zhōng)國及 EMA 要求的限度相同。對于雷尼替丁，FDA 在公告信中(zhōng)提到，建議公司如檢測發現 NDMA 超出可接受日攝入水平（雷尼替丁 96 ng/ 天或 0.32 ppm）則應召回其産品。同樣地，在 FDA 的公告信中(zhōng)也提到二甲雙胍中(zhōng)NDMA 的可接受日攝入水平爲 96 ng/ 天，根據該值及最大(dà)日劑量則可計算出二甲雙胍藥品中(zhōng) NDMA 的限度控制水平。如鹽酸二甲雙胍片最大(dà)日劑量爲 2 g，則該産品中(zhōng) NDMA 的可接受攝入水平是 0.048 ppm。

4. NDMA雜(zá)質的檢測方法

藥品中(zhōng)遺傳毒性雜(zá)質 NDMA 的含量極微，控制限度比較低，對檢測方法靈敏度提出了很高的要求。目前中(zhōng)國藥典委員(yuán)會、美國 FDA、歐洲藥典委員(yuán)會 EDQM 及加拿大(dà)衛生(shēng)部等機構公布的 NDMA 檢測方法主要有 GCMS、GC-MS/MS、LC、LC-HRMS、LC-MS/MS 法等

我(wǒ)司針對鹽酸二甲雙胍原料及制劑中(zhōng)NDMA含量檢驗進行方法開(kāi)發，包括氣質、液質2種方法。鹽酸二甲雙胍片、腸溶片、緩釋片及原料資(zī)料參考結果如下(xià)：